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豬瘟預(yù)防免疫研究進展

84農(nóng)業(yè)網(wǎng)　　時間：2018-03-14 　　作者：佚名　　來源：網(wǎng)絡(luò)整理

豬瘟（Hoecholera，HC），又稱古典豬瘟（Classicalswinefever，CSF），是由豬瘟病毒（ClassicalSWinefevervirus，CSFV）引起的一種高度接觸性熱性傳染病。以出血和發(fā)熱為主要特征，并引起妊娠母豬流產(chǎn)、胎兒畸變、慢性營養(yǎng)性消耗、淋巴細胞和血小板減少等免疫系統(tǒng)受損、繼發(fā)或并發(fā)細菌或其他病毒感染等臨床表現(xiàn)，呈急性或慢性經(jīng)過，是一種對豬危害性極大的傳染病，1984年被國際獸疫局（OIE）列為A類動物傳染病。因此豬瘟的防制歷來是全世界豬瘟存在國非常重視的課題，為此各國都投入了大量的人力、物力，并取得了很大的成績，其中使用疫苗進行免疫接種是控制豬瘟的最重要的手段。

盡管每年我國都投入大量的人力、物力進行豬瘟疫病的防疫和科研工作，使該病得到了較大程度的控制，但由于種種原因，近年來仍有豬瘟發(fā)生。因此，如何提高豬瘟免疫效果，是當(dāng)前獸醫(yī)工作者需要解決的重點課題。本文就豬瘟疫苗免疫程序研究進展作簡要概述，以期為豬瘟的最終控制和消滅提供理論依據(jù)。

1一般的免疫程序

目前國內(nèi)還沒有統(tǒng)一的CSF免疫程序。目前多數(shù)豬場采用仔豬、育肥豬20～28日齡首免和60～70日齡二免，種豬每年2次免疫的免疫程序（母豬的免疫應(yīng)避開配種和妊娠期，以免引起胎盤感染）。林毅等采用DotELISA檢測豬瘟母源抗體消長規(guī)律和4種豬瘟免疫程序（超前免疫組：新生仔豬在吃初乳前接種2頭份豬瘟單價疫苗，注苗后1h讓其吃初乳；超前并加強免疫組：按超前一次免疫后，45日齡用2頭份三聯(lián)苗加強免疫；20日齡首免2頭份豬瘟單價苗，60日齡二免2頭份三聯(lián)苗組。28日齡首免豬瘟單價苗，70日齡二免三聯(lián)苗，又分為1頭份和2頭份免疫組）的免疫效果。結(jié)果，在7、14、21、28和35日齡時.豬瘟母源抗體陽性串分別為80.0%、60.0%、33.3%、13.4%和6.7%，其抗體效價幾何平均值（CMT）分別為1∶88、1∶69、1∶59、1∶40和1∶35。4種免疫程序的豬瘟抗體檢測結(jié)果為，超前免疫和超前井加強免疫2倍量豬瘟單價苗，在6月齡時，其抗體陽性率分別為85%和80%，GMT分別為1∶105和1∶85。20日齡首免2倍量豬瘟單價苗后，60日齡二免2倍量豬瘟-豬肺疫-豬丹毒三聯(lián)苗，在60日齡和6月齡時，抗體陽性率分別為90.0%和87.0%，GMT分別為1∶135和1∶103。28日齡首免豬瘟單價苗，70日齡加免三聯(lián)苗，免疫1頭份和2頭份組在65日齡時，陽性率分別為78.0%和92.0%，6月齡時分別為73.0%和86.0%。結(jié)果表明，免疫2頭份比1頭份的效果好，4種免疫程序的效果都較理想。吳楚泓（2000）在廣東廣三保養(yǎng)豬公司的試驗結(jié)果表明，在無豬瘟流行的地區(qū)，仔豬在65日齡時進行一次性大劑量（5頭份）免疫，抗體有效效價高于2次免疫豬（35日齡首免3頭份，65日齡二免5頭份），與2次免疫相比，既節(jié)省免疫費用，又可獲得較好的免疫保護力。蔡葵蒸等（2002）試驗指出，在豬瘟威脅區(qū)，免疫母豬所產(chǎn)仔豬以28日齡首免4頭份疫苗，55口齡二免2頭份疫苗的免疫程序效果較為可靠。

2預(yù)防免疫研究進展

2.1乳前免疫

乳前免疫也稱零時免疫、超前免疫（簡稱“超免”），即仔豬出生后去除體表黏液，頸側(cè)消毒后肌肉注射豬瘟兔化弱毒苗，與母豬隔離一段時間后再吃初乳的免疫方法。這種免疫方法最早是法國學(xué)者Coltheier于1979年提出的。他認為初生仔豬在吮乳前注射豬瘟兔化弱毒苗可以產(chǎn)生主動免疫。原因有3：①豬的免疫系統(tǒng)發(fā)育早，仔豬出生時免疫系統(tǒng)已相當(dāng)成熟。②對仔豬吮乳后得到的母源抗體水平進行檢測，發(fā)現(xiàn)吃乳后3小時，仔豬血液中已可檢出母源抗體，6～12小時母源抗體的含量達到高峰。所以在血液中母源抗體達到峰值前進行免疫，可使疫苗毒在仔豬體內(nèi)有足夠的時間增殖而不被血液中的母源抗體中和。③豬瘟兔化弱毒株對仔豬安全、無殘毒。同期法國及中國臺灣的試驗也證實了Coitheier的上述觀點。

乳前免疫的一般做法是仔豬出生后肌肉注射豬瘟疫苗1頭份，2～4小時后吃初乳。關(guān)于乳前免疫的主要爭論在于注射疫苗后吃初乳的時間問題。衣翠玲（2002）試驗結(jié)果表明，初生仔豬接種疫苗后間隔60～120分鐘吸吮初乳的免疫效果最好。羅才文等將仔豬出生后立即與母豬隔開，肌肉注射豬瘟疫苗1頭份，注苗后2小時哺初乳；對照組注射1ml生理鹽水。超前免疫組仔豬豬瘟的發(fā)病率為6.48%，死亡率為4.20%；對照組仔豬豬瘟發(fā)病率為78.37%，死亡率為62.16%。超前免疫組仔豬育成率為95.80%，對照組仔豬育成率為37.84%，仔豬斷乳平均體重免疫組比對照組高出1.4kg。張銀河等認為新生仔豬進行豬瘟超前免疫時，應(yīng)選擇在接種后60分鐘吃初乳為最佳時間。顧春海等認為仔豬超免豬瘟疫苗1頭份，30分鐘之后吃初乳的效果好。于泰（1989）等進行的超免研究發(fā)現(xiàn)：仔豬注射豬瘟兔化弱毒苗1頭份，3小時后吃初乳的免疫方法，對仔豬豬瘟的保護長達1年。早期的超免研究多認為一次超免即可提供對豬瘟的終生保護。林毅等在超前免疫后180天，檢測豬瘟抗體的陽性率為85%，據(jù)此認為一次超免可保證絕大多數(shù)豬出欄。但許多學(xué)者認為這種做法是危險的。因為一旦豬群中存在豬瘟強毒，將會迅速增殖蔓延，造成惡果。近年來的實踐越來越支持加大超免劑量和進行加強免疫的免疫方法。何存利（1998）等進行了仔豬豬疽免疫程序的研究。他們建立的乳前免疫方法是：初生仔豬注苗2頭份，2小時后放回母豬身邊吃乳。試驗表明，150日齡時超免仔豬血清陽性率僅73.68%，已不能對豬群提供全程保護。在豬瘟疫區(qū)和受威脅區(qū)，采取乳前免疫和常規(guī)免疫相結(jié)合的方式，才能確保豬群免遭豬瘟侵襲。他們還發(fā)現(xiàn)，通過加大免疫劑量來中和殘余母抗的方法，常規(guī)免疫就能起到很好的效果；張曹民電認為只要解決好母源抗體干擾的問題，不必在所有的豬場都施行超前免疫。朱建國等的試驗支持超前免疫后進行加強免疫的做法，他們認為首免為超免、二免在30～35日齡的豬瘟免疫程序在豬瘟流行區(qū)切實可行；王紅寧等在四川南充、內(nèi)江和成都等地規(guī)模化豬場的試驗表明，超前免疫預(yù)防豬瘟的效果良好，他們推薦的免疫程序為：超前免疫2頭份，6月份加強免疫1次。此外，胡薛英、郭金海、王世權(quán)等均有超前免疫后需做2次免疫的報道。

2.2口服免疫

近年來，豬瘟兔化弱毒刑艮免疫的研究閂趨增多�？诜庖呖梢詷O大地減少豬瘟免疫的工作強度，使用簡便。Chenut等利用C株口服免疫家豬、野豬、綿羊、家兔及野兔，結(jié)果家豬免后4天扁桃體、脾臟、淋巴結(jié)、胸腺、糞及尿中分離不到病毒，3周血清學(xué)陽轉(zhuǎn)，免疫后6周攻毒，能完全保護強毒攻擊；7/8野豬免后血清抗體陽性，扁桃體和脾臟分離不到病毒；綿羊接種后不表現(xiàn)臨床癥狀，血清抗體陰性；家兔接種后表現(xiàn)輕度熱反應(yīng)；野兔則無癥狀；家兔和野兔二者有少數(shù)表現(xiàn)血清學(xué)抗體陽性。Kaden等以C株對斷奶仔豬進行口服免疫，結(jié)果進行大劑量Koslov強毒株攻擊的免疫豬死亡；3/5進行小劑量Alfort187強毒株攻擊的免疫豬存活，血清抗體陽性，但從鼻腔排毒，其中4只豬表現(xiàn)一過性病毒血癥；而所有進行MV140/Riems低毒力毒株的免疫豬均存活，表現(xiàn)短時病毒血癥，均有抗體，但所有存活豬體內(nèi)均無CSFV或CSFVRNA；同年Soos等報道以C株在分娩前167～217天口服免疫母豬，結(jié)果所有3周齡及80%的6周齡仔豬中和抗體滴度為1∶40，25%的10周齡仔豬中和抗體滴度達到1∶20，所有仔豬ELISA抗體檢測均為陽性。

2.3大劑量免疫

除了免疫時間以外，免疫劑量也是影響免疫效果的一個重要因素。近年來，按照常規(guī)劑量免疫，抗體效價低，維持時間短，有些地方和豬場采用2頭份、4頭份，甚至6頭份劑量免疫，則可以達到較好的免疫效果。采用大劑量豬瘟疫苗接種可以在最短的時間內(nèi)激發(fā)機體的免疫防御系統(tǒng)，從而對抗病原的進一步侵入。丁國華等在室內(nèi)、室外分別對豬接種不同劑量的豬瘟兔化弱毒疫苗和牛睪丸細胞苗，免疫期106～130天攻擊石門系豬瘟強毒，室內(nèi)接種組攻毒結(jié)果：豬瘟弱毒苗頭劑量0.5m1150個免疫量，保護率100%（5/5）；頭劑量1.0m1150個免疫量，保護率100%（5/5）；頭劑量1.0ml300個免疫量，保護率100%（4/4）；牛睪丸細胞苗頭劑量0.5m1300個免疫量，保護率100%（4/4）；室外接種組攻毒結(jié)果：豬瘟弱毒苗頭劑量0.5nfil50個免疫量，保護率25%（1/5）；頭劑量1.0ml150個免疫量，保護率80%（4/5）；攻毒對照豬發(fā)病4/4，死亡3/4。試驗證明室外接種0.5ml150個免疫量，保護率極低。張須莊等（2000）通過不同劑量豬瘟疫苗抗體檢測試驗研究認為強化母豬豬瘟免疫，于配種前7～15天肌注4～5頭份豬瘟細胞苗，才能保護仔豬在哺乳期的安全。仔豬應(yīng)在20～25日齡防疫注射3～4頭份豬瘟細胞苗，必要時兩個月后再加強免疫一次。蔣冬福等建議各地根據(jù)豬群母源抗體的水平，適當(dāng)加大免疫劑量，母源抗體高的豬群可用到每豬4頭份，反之則用2頭份。張?zhí)K強（2001）報道，采用母豬免疫宜在哺乳后期和斷乳時，避開配種和懷孕期，免疫劑量為4頭份/頭。種公豬，每年3、9月份各接種一次，4頭份/頭。新生仔豬未吃初乳時，首免：2頭份/頭（注苗2小時后吃初乳），70日齡二免，4頭份/頭，發(fā)現(xiàn)疫情后實行超劑量免疫，立即對全場所有豬實行豬瘟兔化弱毒疫苗超劑量接種8頭份/頭。譚海等（2003）使用豬瘟弱毒疫苗，每頭豬在初乳前接種1頭份、25日齡接種2頭份、60日齡接種3頭份，以后每年的3月、9月各接種4頭份，如果全群種豬進行緊急免疫，每頭接種4頭份，可以有效控制豬瘟的發(fā)生和流行，黃鑒明（1995）在母豬配種前2～3周接種4頭份豬瘟疫苗有效防止了繁殖障礙型豬瘟的發(fā)生。隆先覺按體重計算用苗頭份，10～30kg體重的豬瘟發(fā)病組首次接種5～15頭份、次日再接種5～15頭份可以有效治療豬瘟，初發(fā)病病豬康復(fù)率高達86.1%，對假定健康豬接種5頭份，保護率達100。

但也有試驗證明無須增加疫苗劑量，金柏新等試驗證明仔豬30日齡每頭注射豬瘟疫苗1頭份劑量，30日齡第二次加強免疫注射1頭份劑量的情況下，至180日齡時仍具有保護力。在30和60日齡同樣進行二次免疫，而每次增加疫苗頭份量，未見有增加抗體效價的作用，1頭份與2頭份、4頭份間無顯著性差異，因而認為在豬瘟免疫中，沒有必要增加劑量。

2.4免疫增強劑輔助免疫

由于種種原因，在生產(chǎn)中采取乳前免疫或加大免疫劑量的免疫方法，仍然有抗體水平未達到最低保護線（1∶32，IHA法）的豬只存在。為此通過使用免疫增強劑的途徑來提高動物免疫力，提高豬瘟的免疫效果的研究成為豬瘟防制的熱點之一。

駱延波等以免疫活性因子作為豬瘟疫苗稀釋液給豬接種1頭份，疫苗接種后10天、100天的豬瘟抗體水平較對照組（生理鹽水稀釋液）顯著提高（p＜0.05），疫苗接種后10天、40天，外周血中T淋巴細胞的百分率比對照組顯著提高（P＜0.05），表明在接種豬瘟疫苗時，使用免疫活性因子可以促進T淋巴細胞的增殖，增強其免疫力，有效提高豬瘟疫苗的免疫效果。王川慶等試驗表明：將囊素（bursln，是禽類法氏囊組織產(chǎn)生的一種三肽物質(zhì)，主要存在于法氏囊組織提取液中）與豬瘟兔化弱毒疫苗同時接種于被免疫豬，無不良反應(yīng)，安全可靠�？贵w測定結(jié)果表明囊素與豬瘟兔化弱毒疫苗同時使用，可明顯提高豬體內(nèi)特異性抗體水平，說明囊素對哺乳動物的免疫功能有明顯的促進作用。從接種豬瘟疫苗和囊素后不同時間所測血清中的豬瘟抗體水平比較可以看出：免疫后2周內(nèi)對照組抗體水平較免疫的有所下降，而試驗組的抗體水平卻有所上升，說明試驗組抗體被疫苗中和后抗體上升快空白期短。免疫后4周抗體達到最高峰時試驗組比對照組高出近2個滴度（Log2）。免疫后6周抗體水平有所下降以后，試驗組仍比對照組高出1.4（Log2），說明試驗組的抗體整體水平和上升幅度均比對照組高得多，持續(xù)時間長，意味著其免疫保護力更強。差異顯著性檢驗（單側(cè)t檢驗），表明試驗組與對照組差異顯著。進一步研究表明，囊素最佳使用劑量為0.06ml/kg。蔣冬福等試驗結(jié)果表明，1%健康兔脾淋組織液對豬瘟兔化弱毒細胞培養(yǎng)苗有明顯的免疫增強作用，與用生理鹽水稀釋豬瘟細胞苗相比兩者差異極顯著。試驗一在試驗豬具有較高抗體水平（1∶45～1∶49），且仔豬的免疫系統(tǒng)尚未完全成熟的條件下進行，但A組（兔脾淋組織液稀釋組）的豬瘟幾何平均抗體效價升至1∶215；B組（生理鹽水稀釋組）的僅升到1∶86。試驗二用的是70日齡未免豬，無母源抗體干擾且免疫系統(tǒng)已近成熟，然而用生理鹽水稀釋組免疫后3周豬瘟抗體幾何平均值僅為1∶8，抗體滴度之低，遠未達到抵抗強毒攻擊的最低保護線（1∶32）。說明生產(chǎn)中如按1頭份常規(guī)劑量免疫，仍存在很大的安全隱患。建議各地根據(jù)豬群母源抗體的水平，適當(dāng)加大免疫劑量，母源抗體高的豬群可用到每豬4頭份，反之則用2頭份。李敬璽等用亞硒酸鈉（0.1mg/kg體重）作為豬瘟兔化弱毒疫苗的強化劑對60日齡仔豬進行免疫接種，結(jié)果表明，硒可以使動物外周血液中B淋巴細胞增數(shù)，血清免疫抗體水平提高，出現(xiàn)較早，維持時間較長而且穩(wěn)定。周旭峰等將豬瘟疫苗用玉米花粉多糖稀釋（肌肉注射）分為高劑量組，2ml/頭（含2頭份疫苗和90mg多糖）20頭；低劑量組：2ml/頭（含2頭份疫苗和30mg多糖）20頭；對照組，2ml/頭（用生理鹽水稀釋，含2頭份疫苗）20頭。20日齡仔豬首免，多糖一次性給予，首免后7天，14天，21天，35天及60日齡二免后10天耳靜脈采血，分離血清，用ELISA測其抗體水平。結(jié)果表明首免后7天，高劑量組、對照組與低劑量組之間均有顯著差異（P＜0.05）；14天時，高劑量組、低劑量組均明顯高于對照組（p＜0.05）；首免后35天，低劑量組明顯高于高劑量組和對照組（P＜0.05）。此后各組之間無顯著差異。表明多糖組的血清抗體水平比對照紐普遍升高，尤其在試驗中期，即首免后14天到35天作用更為明顯，且低劑量組對疫苗免疫效果的增強作用略高于高劑量組。張光勤等在注射豬瘟弱毒疫苗和豬丹毒、豬肺疫二聯(lián)苗時，同時注射重組IL-2151μg/kg。結(jié)果表明，進行豬瘟免疫時應(yīng)用重組IL-2，可以顯著提高經(jīng)產(chǎn)母豬和育成母豬豬瘟疫苗的抗體滴度水平及整齊度。李祥瑞等研究了重組IL-2對健康豬和PRRS抗體陽性豬的豬瘟疫苗免疫效果的影響，結(jié)果表明重組IL-2可以顯著提高健康豬豬瘟疫苗免疫效果，單獨注射豬瘟疫苗后，只有25的豬抗體滴度達到1∶64，其余均在1∶2～1∶16之間；而同時注射重組IL-2組，87.5%的豬抗體滴度達到1∶64，最低為1∶32。重組IL-2還可以顯著提高PRRS抗體陽性豬的豬瘟疫苗免疫效果，給經(jīng)2次疫苗免疫但抗體滴度在1∶32以下的PRRS抗體陽性豬單獨注射IL-2，20天后，注射前檢測不到抗體的豬都檢測到了抗體，注射前抗體滴度在1∶8～1∶16之間的豬的抗體滴度提高到1∶32～1∶64。再次用豬瘟疫苗和IL-2共同免疫，可以使抗體滴度提高4倍以上，而不注射的對照組則抗體滴度略有下降，表明IL-2可以減輕PRRS感染所引起的免疫抑制，提高豬瘟疫苗的免疫效果。

綜上所述，豬瘟預(yù)防免疫研究已經(jīng)取得了可喜的進步，相信隨著疫苗免疫程序、方法的不斷完善，豬瘟的控制一定會再上一個新臺階。

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